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AFM用于各種微生物形態(tài)及其活動(dòng)的研究

欄目:行業(yè)新聞 發(fā)布時(shí)間:2022-05-12

AFM的成象載體有很多種,如云母片、玻璃片、石墨、二氧化硅、生物膜等。生物樣品多選用云母片,因?yàn)樗慕饫硇院茫砻娣浅9饣秸?,還可進(jìn)行化學(xué)修飾。

與電鏡、X_線衍射等技術(shù)相比,AFM制樣簡(jiǎn)單,制樣過(guò)程對(duì)樣品原始形態(tài)的影響小。在空氣或真空觀察時(shí),可以將純化的樣品直接滴加到成象載體上,吸附一定時(shí)間后用濾紙吸干、自然晾干或氮?dú)獯蹈傻姆椒ㄈサ舳嘤嗟乃郑M(jìn)行觀察。在液體中觀察時(shí)需要將樣品加入到專用的液體池中。

原子力顯微鏡可用于各種微生物形態(tài)及其活動(dòng)的研究。如病毒、細(xì)菌、原蟲(chóng)、支原體等。

以下僅舉幾例說(shuō)明。觀察了4株金黃色葡萄球菌。無(wú)莢膜的2株細(xì)菌表面光滑,有莢膜的2株表面呈粘液狀,且通過(guò)對(duì)微莢膜形態(tài)的觀察,可以在鏡下區(qū)別這兩株細(xì)菌。

衛(wèi)星煙草花葉病毒是一種球形的RNA病毒,將病毒吸附在新鮮解理的云母片上,分別在空氣中和液體中用AFM觀察。測(cè)量高度得到病毒直徑為17nm,與X_線衍射結(jié)果一致。在PH8.0以下結(jié)晶時(shí),STMV形成正交晶體或單斜晶體,病毒顆粒的大小為17nm,當(dāng)PH>8.0時(shí),STMV結(jié)晶成立方晶體,病毒顆?!澳[脹”為18nm。

單純皰疹病毒是一種有包膜的病毒,大小約100nm。將病毒吸附在云母片上,由于脂蛋白膜的影響,病毒殼蛋白的亞結(jié)構(gòu)分辨不清;用去污劑處理后再觀察,可以清楚地見(jiàn)到殼蛋白的結(jié)構(gòu),甚至衣殼子粒中央的孔也可見(jiàn)到。觀察了痘苗病毒感染單個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。作者用膜片鉗技術(shù)中的微細(xì)吸管固定住單個(gè)培養(yǎng)的猴腎細(xì)胞,將痘苗病毒加入培養(yǎng)液中,用AFM觀察不同時(shí)間后細(xì)胞和病毒的變化。加入病毒后,細(xì)胞變得光滑柔軟,提示在這種狀態(tài)下病毒易于穿過(guò)細(xì)胞膜。2h以后,細(xì)胞表面出現(xiàn)一些大小不一的隆起,逐漸增大,持續(xù)90s-10min后消失,分析是參與病毒組裝的蛋白顆粒的胞吐現(xiàn)象。6h后,細(xì)胞表面出現(xiàn)更大的隆起,約200-300min寬,數(shù)分鐘后突然消失,在細(xì)胞表面留下小的“癍痕”。比較以往的研究,認(rèn)定這是第一子代病毒通過(guò)胞吐作用從細(xì)胞中排出。利用與Haberle相似的裝置對(duì)痘苗病毒感染猴腎細(xì)胞進(jìn)行了更長(zhǎng)時(shí)間的觀察,確認(rèn)了病毒排出細(xì)胞時(shí)的胞吐現(xiàn)象。