AFM可用于分子與分子、分子與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞間作用力的測(cè)量,通過(guò)所測(cè)得的“力-距離”曲線可實(shí)現(xiàn)從分子到細(xì)胞間相互作用力及相關(guān)機(jī)械特性的分析?!傲Γ嚯x”曲線即探針與樣品之間相對(duì)運(yùn)動(dòng)過(guò)程中所測(cè)得的探針與樣品之間相互作用力F和探針與樣品之間距離S之間的關(guān)系曲線。將多次測(cè)量的力曲線結(jié)合可得到力譜,根據(jù)AFM的工作模式可將所得到的力譜分為靜態(tài)力譜與動(dòng)態(tài)力譜:靜態(tài)力譜,針尖與樣品之間的相互作用力與兩者之間距離的關(guān)系可通過(guò)力-距離曲線直接得到;動(dòng)態(tài)力譜,當(dāng)針尖與樣品間足夠接近,會(huì)發(fā)生相互作用,引起共振頻率的變化,通過(guò)頻率變化可以分析表面作用力。動(dòng)態(tài)模式下力測(cè)量具有高靈敏度,可用于小的拉伸區(qū)域下機(jī)械特性的分析,這樣的力靜態(tài)模式下難以測(cè)量。根據(jù)力曲線分析樣品的機(jī)械性能有很多可供選擇的理論模型,其中最常用的為Hertz模型,該模型將探針與樣品的彈性接觸模擬成球體與另一物體之間的接觸,最大的不足在于忽略了黏滯力的存在。許多科學(xué)家在Hertz模型的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn),提出了新的模型,K.L.Johnson等人1971年首次提出彈性球體變形理論(JKR理論),B.V.Derjaguin等人1975年提出了自己的彈性球體變形理論(DMT理論)。這兩個(gè)理論由于反差太大,在剛開(kāi)始提出的時(shí)候引發(fā)了強(qiáng)烈的爭(zhēng)議,最后研究發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)理論為同一模型的兩個(gè)極端情況。L.Sirghi等人于2008年在JKR模型的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)得出了自己的彈性接觸模型,解決了JKR僅限于球形壓頭頂點(diǎn)接觸的實(shí)驗(yàn)要求。W.C.Oliver與G.M.Pharr共同提出的模型能很好地用于柔軟的材料,該模型假定卸載過(guò)程中只恢復(fù)了彈性位移,這樣就可以得到樣品彈性模量。
基于AFM的細(xì)胞機(jī)械特性分析,首先利用輕敲模式確定基底上細(xì)胞的位置,然后AFM的針尖在細(xì)胞表面中心附近的位置點(diǎn)沿垂直方向做“逼近-回退”的往復(fù)運(yùn)動(dòng),分別記錄針尖在逼近細(xì)胞并產(chǎn)生壓痕和回拉過(guò)程中探針懸臂彎曲程度的變化和壓電陶瓷位置的變化。該項(xiàng)技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于與細(xì)胞機(jī)械特性分析相關(guān)的研究中,細(xì)胞機(jī)械特性的研究大體可分為兩類:一類為對(duì)生物特殊功能細(xì)胞的機(jī)械特性的分析,如人體眼角膜各層結(jié)構(gòu)的彈性分析和阿拉伯芥菜根部表皮細(xì)胞的機(jī)械特性分析等,除此之外,微生物機(jī)械特性的分析也是細(xì)胞機(jī)械特性研究的一個(gè)重要方面,如噬菌體成熟過(guò)程中的剛度分析以及生理?xiàng)l件下煙草花葉病毒彈性研究等。第二類為細(xì)胞在外部刺激或各項(xiàng)生理過(guò)程中機(jī)械特性變化的研究,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中機(jī)械特性的分析、藥物刺激前后淋巴瘤活細(xì)胞的形貌和彈性的變化以及松香油與共軛亞油酸對(duì)細(xì)胞骨架機(jī)械特性的影響等,近年來(lái)對(duì)細(xì)胞動(dòng)態(tài)過(guò)程中機(jī)械特性的跟蹤分析已經(jīng)成為生物細(xì)胞分析中的一個(gè)熱點(diǎn)話題。
在生物研究中胚胎發(fā)育、組織形成以及病毒與細(xì)菌引起的感染都依賴于細(xì)胞黏附,這些過(guò)程可以理解為細(xì)胞與細(xì)胞、特殊表面或有機(jī)矩陣之間的黏附,因此細(xì)胞黏附力的研究對(duì)于生命科學(xué)研究具有重要的意義。通過(guò)對(duì)特殊材料制造的AFM探針或功能化的探針測(cè)得的“力-距離”曲線“回退”過(guò)程中的突變點(diǎn)分析可得到研究對(duì)象間的黏附強(qiáng)度,B.J.Park等人通過(guò)對(duì)李斯特菌屬與氮化硅間的黏附強(qiáng)度分析發(fā)現(xiàn)具有致病性的李斯特菌種較同類非致病性菌種黏附強(qiáng)度更大且表現(xiàn)為更突出的非均勻性;H.Shinto等人通過(guò)AFM分析小鼠腫瘤細(xì)胞與聚苯乙烯小球之間黏附力。利用自組裝單層(SAM)技術(shù)包裹AFM探針研究細(xì)胞之間的黏附力包含了多個(gè)細(xì)胞之間的作用力,無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)得細(xì)胞間的作用力。單細(xì)胞力譜(SCFS)的出現(xiàn)解決了這一問(wèn)題,該方法通過(guò)在探針尖端或懸臂上附著一個(gè)細(xì)胞實(shí)現(xiàn)其功能化,能夠準(zhǔn)確地獲取單個(gè)細(xì)胞間的相互作用力。、
單分子力譜(SMFS)通過(guò)操作單個(gè)分子分析分子內(nèi)部或分子間作用力情況,主要應(yīng)用于單分子機(jī)械性能分析及分子間配合作用力分析。細(xì)胞蛋白的機(jī)械特性對(duì)其生理機(jī)能起著至關(guān)重要的作用,SMFS在過(guò)去主要應(yīng)用于體外單個(gè)細(xì)胞膜蛋白機(jī)械特性的分析及折疊實(shí)驗(yàn)中,近幾年,該領(lǐng)域的研究已經(jīng)開(kāi)始轉(zhuǎn)向針對(duì)活體細(xì)胞上單個(gè)蛋白質(zhì)的特性分析,如2009年V.Dupres等人利用SMFS技術(shù)實(shí)現(xiàn)了活酵母細(xì)胞表面Wsc1蛋白納機(jī)械特性的分析。SMFS的另一個(gè)重要應(yīng)用在于利用特定的分子功能化處理后的探針針尖測(cè)量分子間作用力,該技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞表面受體與配體分子間結(jié)合力測(cè)量以及細(xì)胞表面分子識(shí)別。SMFS對(duì)膜蛋白的分析對(duì)于細(xì)胞黏滯、分子識(shí)別、轉(zhuǎn)錄、分子運(yùn)動(dòng)及蛋白質(zhì)折疊等過(guò)程的分析具有重要意義,但是該技術(shù)目前也存在一些問(wèn)題。SMFS最大的問(wèn)題在于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中非特異性作用力信號(hào),該類信號(hào)的存在會(huì)影響甚至覆蓋有用的信號(hào),導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理過(guò)程復(fù)雜且無(wú)法保證準(zhǔn)確。S.Zapotoczny等人2012年提出了一種利用特殊材料對(duì)針尖進(jìn)行功能化從而消除非特異性作用力的方法,并針對(duì)SMFS所存在的復(fù)雜數(shù)據(jù)處理問(wèn)題進(jìn)行了改進(jìn),提出利用黏附頻率來(lái)得到分子間作用力。
蘇州飛時(shí)曼精密儀器有限公司成立于2013年,在2015年,公司獲得江蘇省高新技術(shù)企業(yè)認(rèn)證,擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)30多項(xiàng),研發(fā)的多款產(chǎn)品被評(píng)為高新技術(shù)產(chǎn)品,并通過(guò)CE、ISO9001、SGS認(rèn)證。公司的核心研究方向?yàn)楣狻C(jī)、電、算一體化的微納米檢測(cè)設(shè)備、先進(jìn)的醫(yī)療儀器。飛時(shí)曼作為國(guó)內(nèi)自主品牌、蘇州飛時(shí)曼精密儀器有限公司,其主要產(chǎn)品有:原子力顯微鏡系列(多模式原子力顯微鏡 FM-Nanoview1000AFM、一體式原子力顯微鏡 FM-Nanoview6800AFM、拉曼原子力顯微鏡一體機(jī) FM-NanoviewRa-AFM、光學(xué)原子力顯微鏡一體機(jī) FM-NanoviewOp-AFM、教學(xué)型原子力顯微鏡 FM-Nanoview T-AFM、教學(xué)型掃描隧道顯微鏡 FM-NanoviewT-STM、工業(yè)型原子力顯微鏡 FM-NanoviewLS-AFM、拉曼光譜儀RM5000、拉曼光譜儀RM8000、拉曼光譜儀RM9000)。公司自主研發(fā)的原子力顯微鏡基本都具備輕敲模式,且作為國(guó)內(nèi)自主研發(fā)生產(chǎn)的原子力顯微鏡廠家,只是選配與訂做。